注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
N-羥基琥珀酰亞胺生物素實驗步驟Anti-FBXO43 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

聚尿苷酸使用說明書Anti-FBXO7 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 淋巴細胞 t-淋巴細胞 b-淋巴細胞

8-氮鳥嘌呤價格Anti-FBXW11 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學

鳥嘌呤實驗步驟Anti-FCGR1A Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

2′-脫氧胞苷使用說明書Anti-FCRL5 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 細胞膜受體

牛膽抽提液保存Anti-FEN1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 生長因子和激素 海洋生物

小牛肉浸膏價格Anti-FFAR4 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學 信號轉(zhuǎn)導 干細胞 細胞周期蛋白 表觀遺傳學 G蛋白信號

L-a-磷脂酰膽酰實驗步驟Anti-FFAR3 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 表觀遺傳學

麥芽浸膏湯實驗步驟Anti-FFAR4 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 細胞凋亡 藥物及化合物

順丁烯二酸鈉實驗步驟Anti-FGF11 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學 神經(jīng)生物學 激酶和磷酸酶

乙二醇雙（2-氨基乙基）四乙酸使用說明書Anti-FGF16 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學

脂磷壁酸保存Anti-FGF12 Antibody研究領(lǐng)域 細胞生物 免疫學 細胞膜受體 細胞表面分子 t-淋巴細胞 b-淋巴細胞

線狀 DNA 清除劑30 次品牌Anti-FGF17 Antibody研究領(lǐng)域 免疫學 神經(jīng)生物學

百萬堿基級細菌 （G+）DNAout10 次品牌Anti-FGF18 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

DNA 上樣液 （ 藍 ）,6×10mL品牌Anti-FGF18 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細胞生物 免疫學 生長因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

3,5-二硝基苯甲酯  3--2-甲基丙烯  3-溴丙酸

5,6-二甲氧基-2-(4-基)亞甲基-1-茚  反-1,2-二  3-溴丙醇

3,5-二二乙酯  2-甲基-2-丁烯  4-溴吡唑

1-甲基-1H-咪唑-2-甲醛  1,2-二(4-基)  4-溴鹽酸鹽

1,3-Dimercaptopropane  1,3-丙二硫醇  109-80-8

Chlorophos

1-Hexanethiol  1-己硫醇  111-31-9

2,3-Dimercapto-1-propal  二巰基丙醇  59-52-9

大鼠脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白5(FATP5)ELISA試劑盒 ，英文名： FATP5 ELISA Kit

Mouse soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 小鼠可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

MouseIerferonγ,IFN-γELISAKit 小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1規(guī)格：48T/96T

維生素B6高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCT大鼠降鈣素規(guī)格：48T/96T
馬鼻炎病毒PCR檢測試劑盒說明書小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit *

小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA Kit 進口/分裝

小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA Kit 進口/原裝

小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit *

小鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA Kit進口/原裝

小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit進口/原裝

小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒 英文名稱：Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA Kit進口/原裝
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。