組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
DBPC2,2'-二硫二吡啶 98%乙偶姻 97%

o-Cresol二芐基硫 99%乙偶姻 分析標(biāo)準(zhǔn)品，單聚體

Guanidine hydrochloride2,5-二溴 98%乙偶姻 Natural,≥96%（GC), FCC

DPG2,5-二溴噻吩 96%丁酸正戊酯  99%

Guanidine carbonate4,4-二甲氧基-2-丁酮  95%丁酸正戊酯  ≥99%, Kosher

Isophorone4,4'-二氨基二苯硫 98%2,3-丁二酮 98%

Rotene3,4-二溴噻吩 97%2,3-丁二酮 standard for GC, ≥99.0% (GC)

Corticosterone2,5-二氯噻吩 98%2,3-丁二酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.0% (GC)

MBTH Hydrochloride2,4-二氟苯硫酚 97%2,3-丁二酮 Natural，≥99%, FCC

PVPP3，4－二氟苯硫酚 96%正丁  >99.5%(GC)

1，3-Dihydroxyacetone dimmer2,3-二氯苯硫酚 97%正丁  ACS, ≥99.4%

4-Amiantipyrine2,4-二氯苯硫酚 97%乙酸丁酯 ≥99%, FCC

Cyclohexane2,5-二氯苯硫酚 98%乙酸丁酯 natural, ≥98%, FCC

Acetophene3,5-二氯苯硫酚 97%乙酸桂酯  97%

3'-Amiacetophene2,4-二硫酚 95%乙酸桂酯  ≥98%, FCC

Benzanthrone2,5-二硫酚 98%桂酸桂酯  ≥98%,Kosher

喹硫磷(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%)p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAbLpin1 protein  Lpin1 抗體

二氯喹啉酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAbLPAP  淋巴細(xì)胞磷蛋白磷酸酶相關(guān)蛋白抗體

苯基三氯化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)MyD88 AntibodyLOXL4  賴氨酰氧化酶樣蛋白4抗體

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)β-Actin (8H10D10) Mouse mAbLOXL2  賴氨酰氧化酶相關(guān)蛋白2抗體

標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)β-Actin (8H10D10) Mouse mAbLOX-1/OLR1  凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體

標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjugate)LONP1  線粒體離子肽酶1抗體

威標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=4%)GRB10 Antibodyl-Myc  Myc基因肺癌相關(guān)蛋白抗體

吡嘧磺隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Phospho-SHP-2 (Tyr580) AntibodyLMW Kinigen/Kinigen 1  低分子量生長(zhǎng)促進(jìn)因子抗體（激肽原1）

草胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%)ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAbLMP7  低分子量蛋白酶體7抗體

草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAbLMP7  低分子量蛋白7抗體
蠶微粒子病PCR檢測(cè)試劑盒廠家內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體(S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidine中文名：(S)-(+)-4-芐基-3-丙酰-2-惡唑烷酮?jiǎng)e名：分子式：C13H153

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體5-Benzyl D-glutamate中文名：D-谷氨酸5-苯甲酯別名：分子式：C12H154

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidine中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙酰基-2-惡唑烷酮?jiǎng)e名：分子式：C13H153

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester中文名：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯別名：分子式：C18H194

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體9-(1H-Benzotriazol-1-ylmethyl)-9H-carbazole中文名：9-(1H-苯并三唑-1-基甲基)-9H-咔唑別名：分子式：C19H14N4