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        C4-2 細胞

        產(chǎn)品簡介

        C4-2 細胞公司相關產(chǎn)品:
        磷酸化c-fos抗體CD105/轉化生長因子β受體抗原麥康凱瓊脂平板(9cm)

        磷酸化c-fos抗體半胱酸蛋白酶蛋白-6(抗原)MacConkey Agar

        更新時間:2021-08-30
        訪問次數(shù):903
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        產(chǎn)品名稱:前列腺癌細胞
        英文簡稱:C4-2 細胞

        貨號:LZ-X969599
        規(guī)格:T25
        生長特性:貼壁

        圖片2.jpg 

        凍存培養(yǎng)基:
        凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
        1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
        2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
        培養(yǎng)細胞凍存方案:
        以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
        1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
        2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
        3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
        4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
        注:離心速度和時間取決于細胞種類。
        5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
        6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
        7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

        圖片2.jpg 

        實驗材料: 
        1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
        2. 100ml滅菌燒杯2個;
        3、50ml離心筒2個 
        4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個 
        5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個 
        6、細胞計數(shù)板1塊; 
        7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
        8、酒精燈1臺;

        實驗報告:
        一、分離與培養(yǎng):
           1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
           2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
           3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
           4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
           5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
        二、免疫熒光鑒定:
           1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
           2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
           3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
           4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
           5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
           6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
        鏡下觀察圖像并拍照。

        磷酸化EGF應答因子1抗體炭疽桿菌菌體蛋白Salmonella Shigella Agar

        β素抗體CD105蛋白HE瓊脂平板(9cm)

        磷酸化BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體瓜氨酸環(huán)肽Hektoen Enteric Agar

        ARF鳥苷酸交換因子BIG1抗體C-反應蛋白(抗原)XLD培養(yǎng)基平板(9cm)

        腦特異性同源蛋白BSX抗體克侖特羅偶聯(lián)牛血清白蛋白Xylose Lysine Desoxycholate Medium

        鋅指蛋白47抗體克侖特羅偶聯(lián)血藍蛋白亞硫酸鉍瓊脂平板(9cm)

        ?BTBD14A蛋白抗體畸胎瘤衍化生長因子抗原(表皮生長因子相關肽)N端Bismuth Sulfite Agar

        鋅指蛋白851抗體角蛋白19多肽抗原中國藍瓊脂平板(9cm)

        嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體人癌胚抗原抗原China Blue Agar

        磷酸化c-fos抗體CD105/轉化生長因子β受體抗原麥康凱瓊脂平板(9cm)

        磷酸化c-fos抗體半胱酸蛋白酶蛋白-6(抗原)MacConkey Agar

        磷酸化原癌基因c-Jun抗體CD339/Jagged1抗原山梨麥康凱瓊脂(SMAC)平板(9cm)

        磷酸化原癌基因c-kit抗體即刻早期基因(一種原癌基因)抗原Sorbitol Maconkey Agar Base

        1號染色體開放閱讀框148抗體CD3 epsilon(抗原)結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板(9cm)

        T抗原-4抗體氯霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白Violet Red Bile Agar
        C4-2 細胞溴化太林相關蛋白2抗體花生四烯 ARACHIDONIC ACID(RG)Human

        S100鈣結合蛋白A8抗體L-(-)-阿拉伯糖 ARABITOL, L-(-)-(RG)Human

        唾液結合性免疫球蛋白樣凝集素抗體ASTILBIN(P)Human

        唾液結合性免疫球蛋白樣凝集素1抗體ARISTOLOCHIC ACID (I AND II)(RG)Human

        轉錄因子SP3抗體魁蛤素硫鹽 ARCAINE SULFATE(RG)Human

        轉錄因子SP6抗體阿立新 ARICINE(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse

        SPOP蛋白抗體ARJUNIC ACID(SH)Human, Mouse, Rat

        鈉離子/牛磺膽共轉運蛋白抗體ARJUNGENIN(SH)Human, Mouse

        生長抑素14抗體(2α,3β,19α)-2,3,19-三羥齊墩果-12-烯-28-羧 β-D-吡喃葡萄糖酯 ARJUNETIN(SH)Human, Mouse, Rat
        注意事項:
             盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
             如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
             染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
             如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
             熒光物質均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
             用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
             需自備PBS。
             本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
             為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

         


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