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        HCASMC 細(xì)胞

        產(chǎn)品簡介

        HCASMC 細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:
        蒼術(shù)素凍存管 5.0mL,50個/包,10包/箱 圓底,自立式,外旋密蓋,PP(聚烯)材質(zhì),滅菌,袋裝,硅膠墊圈, Rho(-A.-B.-C)(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
        蒼術(shù)酮培養(yǎng)瓶 75cm2,5個/包,20包/箱 直角斜頸(正方斜口),密封蓋,PS(聚苯乙烯)材質(zhì),滅菌,袋裝,5個/包,20包/箱 RUNX3蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒

        更新時間:2021-08-30
        訪問次數(shù):1079
        詳細(xì)介紹在線留言

        產(chǎn)品名稱:冠狀動脈平滑肌細(xì)胞
        英文簡稱:HCASMC 細(xì)胞

        貨號:LZ-X969706
        規(guī)格:T25
        生長特性:貼壁

        圖片2.jpg 

        我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。

        凍存培養(yǎng)基:
        凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
        1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
        2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
        培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
        以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
        1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
        2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
        3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
        4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
        注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
        5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
        6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
        7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

        圖片2.jpg 

        實(shí)驗(yàn)材料: 
        1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶 
        2. 100ml滅菌燒杯2個;
        3、50ml離心筒2個 
        4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
        5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個 
        6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊; 
        7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把; 
        8、酒精燈1臺;

        實(shí)驗(yàn)報告:
        一、分離與培養(yǎng):
           1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
           2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
           3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
           4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
           5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
        二、免疫熒光鑒定:
           1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
           2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
           3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
           4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
           5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
           6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
        鏡下觀察圖像并拍照。

        注意事項(xiàng):
             盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
             如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
             染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
             如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
             熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
             用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
             需自備PBS。
             本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
             為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
        前杯莧甾酮Peiminine;貝母素乙Bradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

        茜素Cabazitaxel;卡巴他賽Bradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

        羌活Gefitinib;吉非替尼Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

        強(qiáng)力霉素Madecassic acid;羥基積雪草酸Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒

        羥基紅花黃色素ASodium Houttuyfonate;魚腥草素鈉BRDU(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)

        羥基積雪草苷Loganin;馬錢苷BrdU標(biāo)記法繁殖比色法定量檢測試劑盒

        羥基積雪草酸Psoralidin;補(bǔ)骨脂定BrdU標(biāo)記法繁殖流式儀檢測試劑盒

        羥基酪Cyanidin-3-O-Rutinoside;矢車菊素-3-O-蕓香糖苷BrdU標(biāo)記法繁殖流式儀檢測試劑盒

        羥基酪醋酸酯Naringin dihydrochalcone;柚皮苷二氫查爾酮BrdU標(biāo)記法繁殖熒光定量檢測試劑盒

        羥基檸檬酸Cardamomin;豆蔻明BrdU標(biāo)記法繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

        羥基茜草素1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl/DPPH;1,1-二苯基-2-苦基肼BrdU標(biāo)記法載玻片繁殖NBT顯色檢測試劑盒

        羥基吳茱萸堿Pelargonidin-3-O-glucoside;天竺葵素-3-O-葡萄糖苷BrdU標(biāo)記法載玻片繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

        羥基芫花素Streptozocin;鏈脲佐菌素BrdU標(biāo)記法組織冰凍切片繁殖NBT顯色檢測試劑盒

        喬松素Dioscin;薯蕷皂苷/重樓皂苷ⅢBrdU標(biāo)記法組織冰凍切片繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

        蕎麥堿Harpagoside;哈巴俄苷BrdU標(biāo)記法組織石蠟切片繁殖NBT顯色檢測試劑盒
        HCASMC 細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原1,8-桉葉素Human

        超氧化物歧化酶1抗原1-羥-3,4,5-三氧山(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

        超氧化物歧化酶2抗原10-姜酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

        生長抑素抗原10-羥癸(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

        胚胎干關(guān)鍵蛋白10-羥癸烯,10-HDA(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

        SP1轉(zhuǎn)錄生長因子抗原10-羥喜樹(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

        富含半胱氨的性分泌蛋白抗原10-脫乙酰巴卡亭(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

        血清應(yīng)答因子抗原11(α)氧柴胡皂苷FHuman

        固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗原11-O-羅漢果苷V(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse


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